Рабочие листы
к вашим урокам
Скачать
1 слайд
ИММУНОЧИПЫ –
НОВЫЙ ФОРМАТ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ
СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Чеканова Т.А., Маркелов М.Л., Пудова Л.А., Кирдяшкина Н.П., Гоптарь И.А., Судьина А.С., Андрюшина Т.А., Шипулин Г.А.
ФБУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора
2 слайд
Разработка тест-систем в формате иммуночипа для диагностики инфекционных, аллергических и аутоиммунных заболеваний
Почему формат иммуночипа?
3 слайд
ИФА
Иммуночип
ИФА
vs
4 слайд
+
Иммуноблот
+
Иммуночип
VS
Иммуноблот
5 слайд
Технологии не для каждой лаборатории
Evidence (RANDOX)
BioPlex (BIO-RAD)
6 слайд
В основу современного алгоритма серологической диагностики заложена необходимость проведения повторного тестирования для верификации результатов анализа
ИФА
Повтор ИФА
+
Подтверждающий иммуноблоттинг
+/-
Перетестирование через 3-6 месяцев
-
-
-
Повтор подтверждающего иммуноблоттинга
ind
7 слайд
+
=
Иммуночип
– одноэтапный тест для выявления
большого числа значимых биологических маркеров заболеваний,
высокая информативность,
возможность сочетания скрининга и подтверждения в одном формате
сопоставимый (или >)
по чувствительности с ИФА,
а по специфичности с иммуноблотом
8 слайд
Принципиальное отличие биочипов –
возможность выявления в одном анализе множества маркеров
15 Цитокинов
9 слайд
Аллергочип ImmunoCAP ISAC IgE
Общее время проведения реакции на чипе – около 5 часов
Минимальное количество образца – 20 мкл на 103 аллергена
Простота постановки
10 слайд
11 слайд
Новая технология бесконтактной микропечати с помощью современных наноплоттеров
Позволяют печатать
на слайды или дно лунок планшетов
12 слайд
1 чип (слайд) = 1 образец
1 слайд = 16 образцов, 16 Х 4 = 64 образца
1 планшет = 96 образцов
13 слайд
Эррей – лунка планшета
Флуоресцентный профиль эррея на альдегидном слайде
Иммуносорбенты для планарных чипов высокой плотности –
активированные микроскопные слайды
и полистироловые планшеты
14 слайд
КАНАЛ Cy5
(антитела IgG)
КАНАЛ Cy3
(антитела IgM)
Детекция антител разных классов
в одной постановке в одном эррее
15 слайд
Себестоимость анализа при использовании разных серологических методов
Число анализируемых инфекций
(количество маркеров на одну инфекцию = 5)
руб
ИФА + ИБ
ИФА
Иммуночип
16 слайд
Принципы размещения антигенов
и антител на одном иммуночипе
17 слайд
Схема проведения анализа с помощью иммуночипа
Разведение сывороток
Инкубация с образцом, 370С
Детекция
Отмывка
Отмывка
Инкубация c коньюгатом, 370С
18 слайд
ТЕСТ-СИСТЕМЫ
В ФОРМАТЕ ИММУНОЧИПОВ,
РАЗРАБАТЫВАЕМЫЕ В ЦНИИЭ
19 слайд
+
-
Дизайн эррея иммуночипа для серодиагностики
Лайм-боррелиоза
20 слайд
Чувствительность и специфичность иммуночипа
для cеродиагностики ИКБ
(клинический материал предоставлен и охарактеризован клиническими базами: МОНИКИ, НИИР РАМН, Центрами санэпиднадзора - г. Ижевск, г.Киров, г.Ярославль, г. С.-Петербург)
21 слайд
Сравнительное изучение выявления специфических антител в сыворотках крови больных ИКБ
в различных тест-системах
(процент выявления антител,
ограниченная выборка клинического материала, n=42)
%
22 слайд
Изучение дискордантных образцов в иммуноблоте
на наличие антител класса М
23 слайд
Rickettsia
F.tularensis
Инфекции передаваемые клещами рода Ixodes
24 слайд
Иммуночип для выявления cпектра трепонемоспецифических и реагиновых антител
классов G и M, ассоциированных с сифилисом
25 слайд
Результаты изучения чувствительности и специфичности иммуночипа для диагностики сифилиса
26 слайд
Иммуночип для серодиагностики
TORCH-инфекций
Одновременное выявление антител разных классов при использовании смеси конъюгатов (анти-IgG, - IgM, - IgA), меченых флуорофорами, отличающимися по спектральным характеристикам)
Одновременное выявление антител к разным инфекциям на одном стекле
1 иммуночип на комплекс TORCH =
16 ИФА-тест-систем
27 слайд
Дизайн одного эррея для серологической диагностики
TORCH-инфекций
28 слайд
Флуоресцентная детекция спектра антител
разных классов: IgG и IgM
конъюгат анти-IgM человека-Сy3
конъюгат анти-IgM человека-Сy3
+
Канал Cy3
Канал Сy5
+
-
+
-
29 слайд
Совпадение результатов, полученных в иммуночипе,
с данными ИФА при тестировании сывороток
(всего- 700 шт)
30 слайд
Определение значимых маркеров к ВИЧ 1 и 2 типов, ВГС, сифилису
Канал внутреннего
контроля - FITC
Канал учета
специфической
реакции – Сy5
gp120, gp160, gp41, pol, gag, env(ВИЧ2),
AТ p24, сore, NS3, NS4, NS5, Tp47,
Tp17, Tp15, TmpA, IgG, анти-IgG, буфер
31 слайд
Оценка чувствительности иммуночипа «ВИЧ-ВГС-сифилис»
(n = 1290 образцов)
32 слайд
Оценка специфичности иммуночипа «ВИЧ-ВГС-сифилис»
(n = 678 образцов)
33 слайд
Иммуночип для детекции ООИ
( B.anthracis, Y.pestis)
для B.anthracis
для детекции Y.pestis
Аb
SA26
Ab
IgG F1
К -
BSA-Cy5
К -
(ФЦП «Национальная система химической и биологической безопасности РФ“)
Один эррей
34 слайд
Примеры флуоресцентных паттернов.
Аналитическая чувствительность
Y.pestis
B. anthracis
10 3 cells/ml
10 7 cells/ml
10 4 cells/ml
10 5 cells/ml
10 6 cells/ml
10 3 cells/ml
10 4 cells/ml
10 5 cells/ml
10 6 cells/ml
10 7 cells/ml
35 слайд
ДНК-чип для детекции B.anthracis, Y.pestis, F.tularensis
pagA
Bacilus anthracis
Yersinia pestis
Francisella tularensis
CapA
capB
IglBC
FopA
RD1
mVin
pla
caf1
caf1
caf2
Ypo 0394
Ypo 0397
Printing buffer
36 слайд
Схема анализа с помощью ДНК-чипа
Выделение ДНК из материала
ПЦР-амплификация
последовательность промотора T7-RNA полимеразы включена в структуру обратных праймеров
Транскрипция (15-30 мин)
Гибридизация на DНК-чипе (30 мин)
Детекция положительных сигналов на чипе с использованием стрепатавидин-Cy5 (15-20 мин)
Сканирование и анализ результатов
пробо-
подготовка
on-chip
анализ
37 слайд
Примеры флуоресцентных паттернов после гибридизации на ДНК-чипе
B.a. mix
Y.p. mix
F.t. mix
B.a.+ Y.p + F.t. mix
Штамм B. anthracis
F.tularensis штамм
Y.pestis антиген
Праймеры
Материал
38 слайд
Наши планы
Регистрация тест-систем для серодиагностики TORCH, cифилиса, трансфузионных инфекций, боррелиоза.
Разработка программы для обсчета результатов и формирования клинического отчета, удобного для врача-лаборанта.
Организация производства биочипов.
Взаимодействие с клиническими базами.
5 ……..
39 слайд
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!
Рабочие листы
к вашим урокам
Скачать
6 665 132 материала в базе
Настоящий материал опубликован пользователем Кирсанова Любовь Александровна. Инфоурок является информационным посредником и предоставляет пользователям возможность размещать на сайте методические материалы. Всю ответственность за опубликованные материалы, содержащиеся в них сведения, а также за соблюдение авторских прав несут пользователи, загрузившие материал на сайт
Если Вы считаете, что материал нарушает авторские права либо по каким-то другим причинам должен быть удален с сайта, Вы можете оставить жалобу на материал.
Удалить материал
Ваша скидка на курсы
40%
Курс профессиональной переподготовки
500/1000 ч.
Курс повышения квалификации
72/180 ч.
Курс профессиональной переподготовки
300/600 ч.
Курс профессиональной переподготовки
600 ч.
Мини-курс
4 ч.
Оставьте свой комментарий
Авторизуйтесь, чтобы задавать вопросы.